本書涵蓋了當今生物化學研究中常用的技術與方法,側重于對學生基本實驗方法和技能的訓練,并對現(xiàn)代生物化學分析技術如離心分離、電泳、光譜分析、色譜和PCR等技術的基本原理進行了簡要介紹。全書涵蓋了生物化學實驗基礎知識、現(xiàn)代生物化學實驗技術和現(xiàn)代生物化學實驗,最后附錄中收有緩沖液配制、部分常用生化儀器操作規(guī)程與注意事項等內容,F(xiàn)代生物化學實驗部分涉及的55個實驗分屬四大類:基礎性實驗(含22個實驗)、綜合性實驗(含21個實驗)、設計性實驗(含6個實驗)和雙語教學選開實驗(含6個實驗)。實現(xiàn)了生物化學實驗教材在基礎性、綜合性、創(chuàng)新設計性以及雙語實驗教學多方面的全覆蓋,同時在綜合性實驗中包含了7個分子生物學實驗,突出了分子生物學與生物化學之間的學科交叉性。
本書內容全面,可操作性強,實驗重復性好,可作為高等學院校生物科學、生物技術、生物工程以及食品、環(huán)境、農學、林學、化學類等專業(yè)的生物化學實驗教材,也可供相關教師和科研人員參考。
陳傳紅,東華理工大學化學生物與材料科學學院生物系主任,副教授,碩士生導師,2015年以來擔任專業(yè)學位教育碩士學科教學(生物)方向負責人,江西省生態(tài)學會理事。
先后主持完成國家自然科學基金項目 1項、江西省自然科學基金項目 1項、省教育廳科學研究項目1項,教育部教學改革項目1項、江西省教學改革研究課題1 項、江西省專業(yè)學位委員會研究生教學改革項目1項、教學案例庫建設項目1項;參與完成省部級科研項目11項,其中科技部“水專項”重大項目2項;主持與參與完成省級精品課程各1門,參與出版教材(專著)3部;公開發(fā)表研究論文40余篇(其中SCI 8篇);2007年獲得江西省科技進步獎三等獎、2006年撫州市科學技術獎一等獎,獲得江西省高等學?萍汲晒劧泉劊2010年獲得江西省教育科學優(yōu)秀成果獎三等獎。長期擔任本科生物化學等課程教學工作。
第一章 生物化學實驗基礎知識 001
第一節(jié) 生物化學實驗技術發(fā)展概況 001
第二節(jié) 生物化學實驗室常識介紹 003
一、實驗室規(guī)則 003
二、實驗記錄與實驗報告 004
三、實驗室安全措施及注意事項 005
四、實驗室基本操作 007
五、試劑的分級和特殊試劑的保存 012
第二章 現(xiàn)代生物化學實驗技術 013
第一節(jié) 離心分離技術 013
一、離心力的計算 013
二、沉降速度 013
三、沉降系數(shù) 014
四、沉降時間 015
五、離心分離的方法 015
六、離心機的類型及使用 016
七、安全措施 017
第二節(jié) 電泳技術 017
一、電泳的基本原理 017
二、區(qū)帶電泳的分類 019
三、電泳技術的應用 020
第三節(jié) 分光光度技術 026
一、溶液的顏色與光吸收的關系 026
二、吸光度與透光度 026
三、Lambert-Beer定律 027
四、偏離Lambert-Beer定律的產生因素 027
五、可見光及紫外光分光光度法 027
六、分光光度計 028
第四節(jié) 色譜技術 029
一、色譜技術的基本理論 029
二、吸附色譜 031
三、分配色譜 035
四、離子交換色譜 036
五、凝膠色譜法 039
六、親和色譜 042
第五節(jié) 聚合酶鏈式反應(PCR)技術 044
一、PCR反應的基本原理 044
二、PCR反應的基本步驟 046
三、PCR技術的發(fā)展與應用 046
第三章 基礎性實驗 049
第一節(jié) 糖生物化學實驗 049
實驗一 糖的還原性檢驗 049
實驗二 總糖和還原糖的測定 051
Ⅰ Fehling試劑熱滴定法 051
Ⅱ 3, 5-二硝基水楊酸比色定糖法測定還原糖和總糖 054
第二節(jié) 脂類化學實驗 057
實驗一 脂肪碘值的測定 057
實驗二 粗脂肪含量的測定—索氏抽提法 060
第三節(jié) 蛋白質化學實驗 062
實驗一 蛋白質的呈色反應和沉淀反應 062
Ⅰ 蛋白質(多肽)的呈色反應(雙縮脲反應) 062
Ⅱ 蛋白質的呈色反應(茚三酮反應) 063
Ⅲ 蛋白質的沉淀反應 065
實驗二 蛋白質含量測定 067
Ⅰ 紫外吸收法測定蛋白質含量 067
Ⅱ 考馬斯亮藍染色法測定蛋白質含量 068
Ⅲ 雙縮脲法測定蛋白質濃度 070
Ⅳ Folin-酚試劑法(Lowry法)測定蛋白質含量 072
實驗三 牛乳中蛋白質的分離和提取 074
實驗四 氨基酸的分離鑒定(紙色譜法) 076
實驗五 血清蛋白的醋酸纖維薄膜電泳 077
第四節(jié) 核酸化學實驗 080
實驗一 核酸含量的測定 080
Ⅰ 紫外分光光度法測定核酸的含量 080
Ⅱ 二苯胺法測定DNA含量 082
實驗二 酵母核糖核酸的分離及組分鑒定 083
實驗三 三種腺苷酸的分離 085
Ⅰ DEAE-纖維素薄層色譜分離鑒定AMP、ADP和ATP 085
Ⅱ 醋酸纖維素薄膜電泳分離鑒定三種腺苷酸 088
第五節(jié) 酶學實驗 090
實驗一 酶的特性—底物專一性 090
第六節(jié) 維生素實驗 092
實驗一 維生素A的含量測定(比色法) 092
第四章 綜合性實驗 095
第一節(jié) 糖化學實驗 095
實驗一 天然產物中多糖的分離、純化與鑒定 095
Ⅰ 多糖的提取、純化 095
Ⅱ 多糖的鑒定 097
第二節(jié) 蛋白質化學實驗 099
實驗一 總氮量的測定(微量凱氏定氮法) 099
實驗二 聚丙烯酰胺凝膠電泳分離血清蛋白 105
第三節(jié) 核酸化學實驗 109
實驗一 動物肝臟DNA的提取及含量測定 109
實驗二 DNA的定量測定(二苯胺法) 111
第四節(jié) 酶學實驗 112
實驗一 大蒜細胞SOD的提取與分離 112
實驗二 過氧化物酶活力的測定 114
實驗三 乳酸脫氫酶活力測定 116
實驗四 小麥萌發(fā)前后淀粉酶活力的比較 118
實驗五 胰蛋白酶的制備及酶活力的測定 121
實驗六 蛋白水解酶活力的測定 125
第五節(jié) 新陳代謝實驗 129
實驗一 肌糖原的酵解作用 129
實驗二 脂肪酸β-氧化 132
第六節(jié) 分子生物學實驗 134
實驗一 生物基因組DNA的提取 134
實驗二 生物基因組DNA的檢測 137
實驗三 質粒DNA的提取 138
實驗四 DNA的PCR擴增 140
實驗五 DNA瓊脂糖凝膠電泳 143
實驗六 從瓊脂糖凝膠中回收DNA片段 145
實驗七 限制性核酸內切酶消化、連接與TA克隆 147
第五章 設計性實驗 151
實驗設計一 植物總黃酮的提取和測定 152
實驗設計二 堿性過硫酸鉀氧化—紫外分光光度法測總氮 153
實驗設計三 酶促反應的影響因素 153
實驗設計四 核酸的提取及性質鑒定 154
實驗設計五 果蔬維生素C的定量測定 155
實驗設計六 水中常見細菌的快速生化檢測 155
第六章 雙語教學選開實驗 157
Experiment 1 Kit for assaying blood glucose (for hand and automatic analyzer) 157
Experiment 2 Determination of isoelectric point of protein—precipitation method 159
Experiment 3 Experiments of enzyme kinetics 161
Ⅰ. Effects of substrates concentration of enzyme activity: determination of Km of alkaline phosphatase 161
Ⅱ. Effects of inhibitors on the velocities of enzymatic reactions: effect of phosphate on alkaline phosphatase 164
Ⅲ. Effects of pH value on the velocities of enzymatic reactions 165
Ⅳ. Effects of temperature on the velocities of enzymatic reactions 167
附錄 169
附錄一 生物化學常用緩沖液的配制方法 169
附錄二 分子生物學常用試劑、緩沖液的配制方法 175
附錄三 實驗室中常用酸堿的相對密度和濃度 181
附錄四 部分生化與分子生物學實驗儀器的操作規(guī)程 181
附錄五 常用生化與分子生物學實驗儀器的使用注意事項 183
參考文獻 189