本書采用組織塊培養(yǎng)法構建奶牛乳腺上皮細胞(DCMECs)模型。DCMECs添加乳脂肪合成前體物乙酸鈉、-羥基丁酸鈉、乙酸鈉和-羥基丁酸鈉混合物、軟脂酸和硬脂酸,qRT-PCR檢測DCMECs脂肪酸攝取、轉運、活化相關蛋白基因、脂肪酸從頭合成、去飽和酶基因、甘油三酯合成酶相關基因和乳脂肪合成轉錄調控因子相關基因的mRNA表達,Western blotting檢測乳脂肪合成轉錄調控因子的蛋白表達,酶活性試劑盒檢測甘油三酯合成酶活性變化,采用細胞免疫熒光法檢測PPAR的胞內定位情況。對DCMECs 的PPAR進行基因沉寂和超表達,通過培養(yǎng)基中甘油三酯含量確定PPAR基因沉寂和超表達的DCMECs對各脂肪酸的濃度需求變化,同時采用qRT-PCR、Western blotting和酶活性試劑盒檢測各脂肪酸對PPAR基因沉寂和超表達的DCMECs乳脂肪合成相關基因表達、轉錄調控因子蛋白表達及甘油三酯合成酶活性的影響。
劉莉莉,黑龍江人,東北農業(yè)大學動物生物化學與分子生物學專業(yè)博士。2007年7月至今,工作于黑龍江中醫(yī)藥大學生物技術制藥教研室,從事分子生物學、生物技術原理、生物技術制藥、現(xiàn)代生物技術概論、藥學生物技術概論、生物藥物分離純化等多門理論課程和實驗課程的教學,有扎實的理論基礎,并擅長分子生物學實驗、動物細胞培養(yǎng)和基因的功能研究等。
本書采用組織塊培養(yǎng)法構建奶牛乳腺上皮細胞(DCMECs)模型。DCMECs添加乳脂肪合成前體物乙酸鈉、-羥基丁酸鈉、乙酸鈉和-羥基丁酸鈉混合物、軟脂酸和硬脂酸,qRT-PCR檢測DCMECs脂肪酸攝取、轉運、活化相關蛋白基因、脂肪酸從頭合成、去飽和酶基因、甘油三酯合成酶相關基因和乳脂肪合成轉錄調控因子相關基因的mRNA表達,Western blotting檢測乳脂肪合成轉錄調控因子的蛋白表達,酶活性試劑盒檢測甘油三酯合成酶活性變化,采用細胞免疫熒光法檢測PPAR的胞內定位情況。對DCMECs 的PPAR進行基因沉寂和超表達,通過培養(yǎng)基中甘油三酯含量確定PPAR基因沉寂和超表達的DCMECs對各脂肪酸的濃度需求變化,同時采用qRT-PCR、Western blotting和酶活性試劑盒檢測各脂肪酸對PPAR基因沉寂和超表達的DCMECs乳脂肪合成相關基因表達、轉錄調控因子蛋白表達及甘油三酯合成酶活性的影響。
劉莉莉,黑龍江人,東北農業(yè)大學動物生物化學與分子生物學專業(yè)博士。2007年7月至今,工作于黑龍江中醫(yī)藥大學生物技術制藥教研室,從事分子生物學、生物技術原理、生物技術制藥、現(xiàn)代生物技術概論、藥學生物技術概論、生物藥物分離純化等多門理論課程和實驗課程的教學,有扎實的理論基礎,并擅長分子生物學實驗、動物細胞培養(yǎng)和基因的功能研究等。