《高等學校實驗教學改革教材:生物工程技術與綜合實驗》共兩篇,上篇為生物工程技術,下篇為生物工程實驗。主要內(nèi)容包括緒論、基因工程、細胞工程、發(fā)酵工程、酶工程、生物反應器和實驗等方面的基本操作技術。應用上,包括了醫(yī)藥、能源、食品等,特別是生物能源、纖維素的利用等是目前生物工程領域的研究熱點。教材突出生物工程實驗的綜合性與創(chuàng)新性,適合作為生物技術和生物工程專業(yè)本科實驗教學的教科書;同時可供從事相關專業(yè)的科研技術人員學習和參考。
生物工程綜合實驗是實現(xiàn)生物工程專業(yè)培養(yǎng)目標的重要實踐環(huán)節(jié)。在教學改革中,將零散的專業(yè)實驗教學從理論教學中脫離出來,設立一門獨立的生物工程綜合實驗課;將原來隸屬于各門理論課的實驗課剝離,重新整合、設計成“獨立”的實驗課程體系,進而與理論課程體系并駕齊驅(qū),成為在人才培養(yǎng)目標上并重的既緊密聯(lián)系又相對獨立的兩個支柱。經(jīng)過修訂后的生物工程本科教學計劃中,獨立開設了一門生物工程綜合實驗課,課程安排在專業(yè)理論教學結(jié)束后,分兩個階段進行:第一階段在第六學期末,在學習完生物化學、微生物學、基因工程、微生物工程原理、生物工業(yè)下游技術、生物工程設備等必修課程后,是生物工程專業(yè)本科生集中進行的一次生物工程專業(yè)實驗的系統(tǒng)操作。在這一階段,要求學生掌握生物工程的基本實驗操作和步驟,鞏固所學的專業(yè)基礎理論知識。第二階段在第七學期中,根據(jù)學生自主選擇的專業(yè)方向,結(jié)合專業(yè)方向開設的課程,設計相關實驗。學生可以根據(jù)自己的興趣愛好,結(jié)合后續(xù)教學環(huán)節(jié),如畢業(yè)設計或論文和將來自己可能的工作方向,選修其中的任何一個方向或多個方向。實驗課的課時安排則集中連續(xù)進行,使前一次實驗為后一次實驗做準備,實驗內(nèi)容環(huán)環(huán)相扣,保證實驗的連續(xù)性,從而可得出比較準確的實驗結(jié)果。實驗內(nèi)容覆蓋了生物操作的上、中、下游的全過程,包括了好氧發(fā)酵、厭氧發(fā)酵等發(fā)酵類型,以及基因工程、細胞工程、酶工程和生物制藥等操作技術。實驗內(nèi)容同時將過去簡單的驗證性實驗轉(zhuǎn)變?yōu)榫C合性、設計性實驗。
本書分為生物工程技術(上篇)和生物工程實驗(下篇)兩部分,并對生物工程實驗中涉及的實驗技術、反應原理、流程安排等問題進行了較為詳細的闡述。全書內(nèi)容豐富,緒論部分對生物工程學主要進展進行了鳥瞰式的敘述;其他章節(jié)的內(nèi)容涉及基因工程、細胞工程、發(fā)酵工程、酶工程、生物反應器的技術理論及實驗,還包括生物制藥技術及生物工程綜合大實驗等內(nèi)容。本書在介紹不同的實驗技術時,選取了各學科中有代表性的實驗方法和研究技術,并結(jié)合科研、教學實踐進行了比較和分析;附錄還列出了一些常用試劑、緩沖溶液等的配制方法及一些常用數(shù)據(jù)和縮略語等。全書層次清晰,內(nèi)容安排合理,針對性和應用性強。本書可供生物技術、生物工程及相關領域本科生及研究人員進行學習和參考。
本教材由廣西大學生命科學與技術學院生物工程系楊洋主編。各部分編寫工作分工如下:生物工程技術(上篇)第一、第二單元由粟桂嬌編寫,第三單元由閻欲曉、莫柏立編寫,第四單元由莫柏立編寫,第五單元由楊洋編寫;生物工程實驗(下篇)中基因工程實驗(第一單元)由陸堅、盧春花編寫,細胞工程實驗(第二單元)由粟桂嬌編寫,發(fā)酵工程實驗(第三、四單元)由粟桂嬌、閻欲曉、朱萍編寫,酶工程實驗(第五單元)由莫柏立、杜麗琴、蔣承建編寫,生物制藥技術(第六單元)由盧潔、蒙健宗編寫,生物工程綜合大實驗(第七單元)由粟桂嬌、閻欲曉、杜麗琴編寫。本教材在編寫過程中,得到了學校、出版社的大力支持和幫助,謹在此一并表示衷心感謝。
由于編者水平有限,書中定會存在錯誤,敬請讀者批評指正。
上篇 生物工程技術
緒論
第一單元 基因工程
第一節(jié) 基因工程概述
第二節(jié) 基因工程實施的四大要素
第三節(jié) 基因工程實驗操作技術及操作要點
第二單元 細胞工程
第一節(jié) 細胞工程概述
第二節(jié) 細胞培養(yǎng)的基本原理與技術
第三節(jié) 植物細胞培養(yǎng)技術
第四節(jié) 動物細胞培養(yǎng)技術
第五節(jié) 組織細胞的培養(yǎng)方法
第三單元 發(fā)酵工程
第一節(jié) 發(fā)酵工程概述
第二節(jié) 菌種與種子擴大培養(yǎng)
第三節(jié) 培養(yǎng)基及其制備
第四節(jié) 培養(yǎng)基與設備滅菌
第五節(jié) 發(fā)酵工藝控制
第六節(jié) 下游加工過程
第四單元 酶工程
第一節(jié) 酶的性質(zhì)和活力測定
第二節(jié) 酶的生產(chǎn)和制備
第三節(jié) 酶細胞和原生質(zhì)體的固定化
第四節(jié) 酶工程研究進展
第五單元 生物反應器
第一節(jié) 酶反應器
第二節(jié) 細胞培養(yǎng)反應器
第三節(jié) 發(fā)酵設備
第四節(jié) 生物反應器的檢測及控制
下篇 生物工程實驗
第一單元 基因工程
實驗1 黃單胞菌基因組DNA的提取
實驗2 瓊脂糖凝膠電泳檢測DNA
實驗3 質(zhì)粒DNA的提取
實驗4 聚合酶鏈式反應(PCR)擴增DNA片段
實驗5 DNA的限制性內(nèi)切酶酶切
實驗6 重組DNA分子的構(gòu)建
實驗7 化學轉(zhuǎn)化法感受態(tài)大腸桿菌的制備與轉(zhuǎn)化
實驗8 重組質(zhì)粒DNA的PCR驗證
實驗9 核酸分子的轉(zhuǎn)移:Southern印跡和電泳轉(zhuǎn)移
第二單元 細胞工程
實驗10 細胞工程實驗基礎
實驗11 植物組織和細胞培養(yǎng)
實驗12 家蠶細胞傳代培養(yǎng)
實驗13 家蠶細胞融合
實驗14 PEG誘導動物細胞融合
第三單元 發(fā)酵工程
實驗15 液體發(fā)酵法生產(chǎn)鏈霉素
實驗16 鹽酸慶大霉素生產(chǎn)全流程實驗
實驗17 離子交換法提取谷氨酸實驗
實驗18 搖瓶溶氧系數(shù)的測定
實驗19 發(fā)酵罐溶氧速率測定實驗
實驗20 面包酵母分批與流加培養(yǎng)實驗
第四單元 發(fā)酵產(chǎn)品制作
實驗21 淡色啤酒釀制
實驗22 白酒釀制
實驗23 柑橘渣微生物發(fā)酵生產(chǎn)飼料蛋白
實驗24 發(fā)酵法釀制食醋
實驗25 小曲酒餅的制作
實驗26 小曲白酒的制作
實驗27 醬油種曲的制作
實驗28 醬油的制作
實驗29 葡萄酒的制作
實驗30 糯米甜酒的釀制
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因此,對流動狀態(tài)的分析與研究是反應器選型、設計和優(yōu)化的基礎。連續(xù)操作具有以下特點:①連續(xù)操作有利于過程的研究與分析;②對連續(xù)反應可進行高效的過程控制;③連續(xù)操作的產(chǎn)品質(zhì)量穩(wěn)定;④生產(chǎn)效率較高;⑤控制穩(wěn)定,操作費用也較低;⑥對細胞生長時同步產(chǎn)生的代謝副產(chǎn)物的生成不能控制;⑦操作周期長,容易受到雜菌污染;⑧需要使用費用較高的檢測手段和控制設備。
生物反應器使用連續(xù)操作的主要目的是利用其產(chǎn)品質(zhì)量穩(wěn)定、生產(chǎn)效率較高、適合于大批量生產(chǎn)的特點。已成功應用的典型例子有:使用氣升式反應器的大規(guī)模單細胞蛋白的生產(chǎn),固定化葡萄糖異構(gòu)酶催化的高果糖漿的生產(chǎn),對廢水的生物處理過程等。
。1)攪拌罐型反應器。包括連續(xù)式攪拌罐、多級連續(xù)攪拌罐、攪拌罐超濾器聯(lián)合裝置、多釜串聯(lián)半連續(xù)操作等。無論分批式還是連續(xù)式混合罐型的反應器,都具有結(jié)構(gòu)簡單、溫度和pH易控制,能夠處理膠體底物和不溶性底物、催化劑更換方便等優(yōu)點。但是催化劑顆粒容易被攪拌槳葉的剪切力破壞。
。2)固定床型反應器。把催化劑填充在固定床(填充床)中的反應器叫做固定床型反應器。這是一種使用最廣泛的固定化酶反應器,具有單位體積的催化劑負荷量高、結(jié)構(gòu)簡單、容易放大、剪切力小、催化效率高等優(yōu)點,特別適合于存在底物抑制的催化反應。不足的是溫度和pH難于控制,底物和產(chǎn)物會產(chǎn)生軸向分布,易引起相應的酶失活的程度也呈軸向分布,更換催化劑相當麻煩,柱內(nèi)壓降大,底物需加壓后才能進入。操作方式可以是底物溶液從底部向頂部流動,也可以是上進下出的流動方式。這類反應器包括填充床、帶循環(huán)的固定床、列管式固定床等。
。3)流化床型反應器。流化床型反應器是一種裝有較小顆粒的垂直塔式反應器,如流化床。底物以一定流速從下向上流過,使固定化酶顆粒在流動中維持懸浮狀態(tài)并進行反應,這時的固定化酶顆粒和流體可以被看做是均勻混合的流體。具有傳熱與傳質(zhì)特性好、不堵塞、能處理粉狀底物、壓降較小等優(yōu)點,也很適合需要排氣、供氣的反應。但它需要較高的流速才能維持粒子的充分流態(tài)化,而且放大較困難。
。4)膜式反應器。膜式反應器是利用膜的分離功能,使酶或細胞截留在反應器系統(tǒng)中,同時完成生物反應和產(chǎn)物分離過程的生物反應器。膜分離過程可以達到以下目的:①增大反應速率;②提高反應的選擇性和轉(zhuǎn)化率;③截留生物催化劑;④減少總過程的工藝步驟。根據(jù)膜反應器的不同特征,按如下分類:①底物和產(chǎn)物通過膜的傳質(zhì)推動力的不同,可分為壓差推動和濃度差推動的膜反應器;②膜材料的特性不同,可分為微濾膜反應器、反滲透膜反應器、超濾膜反應器和透析膜反應器,以及對稱膜和非對稱膜反應器等;③膜反應器的結(jié)構(gòu)型式不同,可分為全板膜、螺旋卷繞膜、管狀膜及中空纖維膜等反應器;④反應和分離的耦合方式不同,可分為循環(huán)式和一體式膜反應器。
在選擇膜反應器時,從過程經(jīng)濟的角度而言,一般考慮兩個重要特性:①膜的選擇性,即將混合物中的組分分離開來的能力;②膜的效率(生產(chǎn)能力),即在一定操作條件下可達到的滲透量的通量。
3.半間歇半連續(xù)操作反應器
此類反應器的主要特征是:反應過程中,反應物連續(xù)或間歇加入,產(chǎn)物一次性或間斷性排出。半連續(xù)操作既有間歇操作的非穩(wěn)態(tài)的分批特性,也有連續(xù)操作的連續(xù)加料與出料的特性。
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